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分享一下NEST细胞培养过程中出现哪些问题

点击次数:566 发布时间:2020-09-21
     NEST细胞培养对它不了解的朋友可能会觉得它很神秘,其实它的秘密很简单,一个24孔板中一个大孔中包括1200个400um的倒置微孔,能将捕获的单个iPS培养成类胚体,可以培养50至3000个一样大小的细胞团!当你向培养板中加入细胞时,细胞会均匀的落入每个微孔孔中!它广泛的应用于iPS/ES培养成类胚体!
 
    下面我就来给大家分享下NEST细胞培养过程中出现的问题:
 
    一、细胞成长曲线测守时为什么要做重复孔?
 
    答:测定细胞成长曲线细胞计数时挑选3个复孔,每孔分别计三次,取其平均值,目的是减小操作差错。
 
    二、为什么制作的细胞成长曲线没有到达平台期?
 
    答:可能有以下原因:一是细胞接种密度过低;二是细胞培育时刻过短;三是细胞成长状况欠好,使其不能正常增殖。
 
    三、怎么挑选细胞接种数?
 
    答:可根据细胞传代培育过程中接种数及细胞成长周期进行核算,细胞接种数因细胞的不同而不同。
 
    四、细胞计数时为什么要用台盼蓝染色?
 
    答:参加台盼蓝后,活细胞不上色,台盼蓝上色的细胞呈深蓝色,是不健康或已死亡的细胞,不能计数。
 
    五、测定细胞成长曲线的含义是什么?
 
    答:细胞成长曲线是测定细胞肯定成长数的常用办法,也是断定细胞生机的重要目标,是培育细胞生物学特性的基本参数。由于细胞太小,无法测单个细胞的成长状况,所以测细胞集体的成长曲线。
 
    六、细胞成长曲线测定周期是几天?
 
    答:一般是一个星期。
 
    七、细胞成长曲线还有其他办法制作吗?
 
    答:当然有。我们说到较多的是直接计数的办法,除此以外还有相对计数的办法,该类办法首先要制作规范曲线,标定细胞数和某个变量的函数,然后我们只需要测定每天这个变量的值便能够核算出细胞数。常用的是MTT、CCK8等比色的办法。
 
    八、为什么细胞计数多天,细胞数没有添加反而削减?
 
    答:一般细胞传代后,会有一个成长缓慢的潜伏期,细胞不增殖,而细胞会有正常的死亡,故细胞数不添加反而削减。
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