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简单了解一下NEST细胞培养有哪些相关问题

点击次数:552 发布时间:2020-12-17
   NEST细胞培养包括初代培养及各种细胞系,当生长达到一定密度后,都需做传代处理。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细胞数量和细胞增殖速度等有关。接种细胞数量大、细胞基数大、相同增殖速度条件下,细胞数量增加与饱和速度相对要快。连续细胞系和肿瘤细胞系比初代培养细胞增殖快,培养液中血清含量多时细胞增殖比少时快。以上情况都会缩短传代时间。
 
  NEST细胞培养相关问题:
 
  1、冷冻管应如何解冻?
 
  取出冷冻管后,须立即放入37°C水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。
 
  2、细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?
 
  除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
 
  3、可否使用与原先培养条件不同之培养基?
 
  不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。
 
  4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
 
  不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生及大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
 
  5、何谓FBS,FCS,CS,HS?
 
  FBS和FCS是相同的意思,两者都是指胎牛血清,FCS乃错误的使用字眼,请不要再使用。CS则是指小牛血清。HS则是指马血清。
 
  6、培养细胞时应使用5%或10%CO2?或根本没有影响?
 
  一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定NEST细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。
 
  7、何时须更换培养基?
 
  视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。
 
  8、培养基中是否须添加抗生素?
 
  除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。
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