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分享程序降温盒使用注意事项的几点经验

点击次数:1700 发布时间:2021-01-19
   程序降温盒采用聚碳酸脂(PC)盒体,蓝色高密度聚乙烯(HDPE)盖,白色高密度聚乙烯(HDPE)管槽,泡沫衬垫。
 
  可实现每分钟1℃降温,大大提高冻存细胞的存活率,从冰箱拿出来后,泡沫内衬及异丙醇也可保证逐步升温,故也可用于细胞复苏。
 
  用之前在盒夹层内注入100%浓度的异丙醇,管槽可放置1-2ml冻存管或储液管18个,同时管槽支架可防止管子与酒精接触,以防由于毛细作用而造成污染,或弄掉标签。
 
  细胞冻存有两种方法:传统的方法是利用冷存管处于4℃、-20℃、-80℃保存,程序降温方法是利用设定程序由室温降低至-80℃,后再放置到液氮槽中长期保存。
 
  程序降温盒的使用注意事项如下:
 
  经验1:冻存盒外表面有刻度的吧,异丙醇液面要高于底线。
 
  冻存盒肯定是先放在室温,然后放进去细胞,置于-80,利用异丙醇实现梯度降温啊。)
 
  根据论坛里的讨论,异丙醇使用过一段时间后是要更换的,但是我一直没换过,也没发现很大问题。
 
  经验2:我们实验室冻存盒平时放4度,需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮,贵重的细胞尽快转移,不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的,很方便,效果也不错的。
 
  经验3:异丙醇的量是要保证的,不能低于表明的线,否则不能起到很好的程序性降温作用,我们是在4度放置,放了细胞后立马放到-80度冰箱,第二天再转移到液氮,效果很不错。异丙醇熔点:-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性有毒液体。注意了有可燃性!急性毒性:口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤。刺激数据:眼睛-兔子100毫克/!请注意清理!
 
  经验4:应该不可以把冻存盒放4°的,因为梯度降温的起始点是室温20°左右,所以从-80℃拿出来的冻存盒应该现在室温静置一段时间待其恢复到室温再使用。而其中的异丙醇应使用6~7此后更换一次,而且保证液体量达到刻度线,否则降温效果会受到影响。
 
  经验5:冻存盒里的异丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理论上是5次以后更换异丙醇,但是异丙醇对环境有害,我们可以多用几次,只是少了的时候要加满。还有冻存液里面的DMSO对细胞有毒性,尤其是室温的时候,所以冻存盒和冻存液先放4°,等把细胞用冻存液重悬好了放在冻存盒里,还放回4°,等到出细胞间的时候再拿到-80°里面保存。过夜再转入液氮。
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