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nest共聚焦皿和共聚焦板使用方法

点击次数:5925 发布时间:2016-03-06

NEST玻底培养皿和玻底培养板使用方法

近日来很多客户向我们咨询NEST玻底皿/板的使用方法,这里我们将NEST玻底皿/板的常规使用方法刊登出来供大家参考。

预平衡:在玻底培养皿加入3ml培养液,在培养箱中放置15分钟。

加细胞:吸去培养液,在底孔中加入500ul含细胞的培养液。在培养箱中放置2小时,

让细胞沉降贴壁。

加培养液:小心加入2-3ml不含细胞的培养液。该步骤用于为细胞提供足够的培养

液,同时减少由于水份挥发带来的渗透压的变化。

*根据实验的要求,可以合并步骤2和3,在预平衡后直接加入2-3毫升含细胞的培养液。

 

 

多聚赖氨酸包被

1. 浓度0.01%(100ug/mL)的多聚赖氨酸溶液加入玻底板或玻底皿中(爬片可置于普通皿内进行加液),以刚好盖满玻底(或玻片为准上盖盖好放到培养箱中(37 5%CO2)包被30分钟。

2. 30分钟后取出板皿,用吸管将多余的多聚赖氨酸溶液吸出。换吸管,加入三蒸水,没,冲洗三次再将水吸出来。反复三次。整个过程无菌操作台上进行并且保证吸管无菌

3. zui后将铺好的板或皿)放于培养箱待用。

 

多聚赖氨酸及明胶包被方法

多聚赖氨酸(分子量30000-70000),用0.1M硼酸 /NaOH缓冲液PH8.4 (高压灭菌)做100倍稀释成200μg/mL应用液,0.22μm滤膜可用一次性针头过滤器CA 0.22μm)过滤。PLL滴加于培养上,保证全部覆盖,室温guoye。次日吸去多余部分(可回收),双蒸水洗两遍,置于超净台中紫外线下风机吹干即可。

 

明胶母液2%浓度用去离子水稀释成浓度1%0.1%,有条件的建议多尝试下确定zui符合自己的浓度),国产或进口均可。建议配置好包被液做一次高温高压灭菌。包被液滴加培养面上,保证全部覆盖,37℃包被1~2小时或4℃冰箱guoye,待用时取出吸去多余部分,可用培养液清洗1~2后使用

 

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